Ну, среды в чашки и пробирки лью горячими, а сусло-агар вообще кипящим, т.о., если посуда чистая, хорошо помыта, то за сутки вряд ли что-то произойдёт критичное при хранении в холодильнике, если что можно прогреть до 80°С на бане...
У меня в одном холодильнике есть "зона свежести", там около 0°С...
И да, агар-агар надо брать надёжный. 😉
Штативы с пробирками стерилизуют накрыв их фольгой прямо листом все сразу, на колбы, на горлышко надевают колпачок из фольги-на будущее защита от пыли. Или можно крафтбумагой.
Я бы советовал не заморачиваться на скороварку, объём маловат...
А вот, автоклав-удобен очень, в нем же можно не только среды готовить, но и заготовки, типа тушенки и тд, и тп... Т.о. вполне в хозяйстве применим.
Народ, через сколько часов на поверхности среды уже должны появиться различимые следы колоний?
Сеял в воскресенье утром. Ещё рано или я "сухари" плохо регидрировал - рано зачерпнул петлей.
Олег, какой емкости (какого диаметра колечко) у тебя петля?
Проволока есть. Думаю, может на будущее сделать себе меньшую петлю ~ 1 мм в диаметре.
warkan сказал(а)
Народ, через сколько часов на поверхности среды уже должны появиться различимые следы колоний?
Сеял в воскресенье утром. Ещё рано или я "сухари" плохо регидрировал - рано зачерпнул петлей.Олег, какой емкости (какого диаметра колечко) у тебя петля?
Проволока есть. Думаю, может на будущее сделать себе меньшую петлю ~ 1 мм в диаметре.
Ну часы это в термостате, да и то не все штаммы, а так сутки-двое-трое, опять же в зависимости от штамма. Так что жди.
Про колечко обсуждали в этой ветке, 1 мм норм.
warkan сказал(а)
Ещё рано или я "сухари" плохо регидрировал - рано зачерпнул петлей.
Надо было разбродить, а не регидрировать. Так быстрее. Надо сеять на чашку хорошую, активную культуру, новые активные клетки, а не только-только проснувшиеся.
warkan сказал(а)
Запомнить: выводить ЧКД из "сухарей" - регидрировать в стерильной пробирке/склянке (заливать физраствором - растрор хлорида натрия 0,9%) - потом разбродить в 5 мл сусла - сеять дождавшись начала брожения (сусло помутнеет).
Да
Выросло:
Поставил в холодильник до вечера, чтоб не разрастались. Вечером в 5 мл (обещали к вечеру сусло и посуду простерилизовать в автоклаве).
Есть хоть что выбрать?
По мне, много я среды набрал в петлю, всё же. И петлю нужно меньшего диаметра (Олег, как всегда, прав!) - 1 мм.
Ну, для первого раза... надеюсь...
warkan сказал(а)
Выросло:
Поставил в холодильник до вечера, чтоб не разрастались. Вечером в 5 мл (обещали к вечеру сусло и посуду простерилизовать в автоклаве).
Есть хоть что выбрать?
По мне, много я среды набрал в петлю, всё же. И петлю нужно меньшего диаметра (Олег, как всегда, прав!) - 1 мм.
Ну, для первого раза... надеюсь...
Народ, расскажите как у вас получается такие жирнющие штрихи?
Ты на каждый штрих что ли петлю окунал в сусло?
Да нет. Один раз. Потом обжигал при каждом новом штрихе. Грешу на большой (сейчас 2,5-3 мм примерно) диаметр петли. Видимо, она много и "зачерпывает". Может стряхивал с неё мало, надо больше. Короче, практиковаться надо.
Выбрать-то есть что (одиночные колонии)?
Да, жирнющий след...
Можно развести культуру в физрастворе.
Ещё посмотри на петлю, если есть скрутка у кольца, то она тоже имеет ёмкость.
У меня петля для чашек маленькая и без скрутки.
Можно сделать вообще "иглу", без кольца.
Знакомая в лабе вообще стерильными зубочистками сеет. Без петли обходится. Просто выкидывает.
Работает сейчас, кстати, в Германии по гранту.
Есть хоть что выбрать?
По мне, много я среды набрал в петлю, всё же.
Одни и те же грабли, наверное, Олег уже устал отвечать))))
Ну в принципе, есть в правом верхнем углу 3 условноотдельные колонии и 1 в левом нижнем углу. Но лучше пересеять.
Можно сделать вообще "иглу", без кольца.
Знакомая в лабе вообще стерильными зубочистками сеет. Без петли обходится. Просто выкидывает.
А какая там техника? Макаешь и колешь агар? Просто стерильные одноразовые иглы продаются в Комусе за смешные деньги (я в этой ветке выкладывал), может для новичков так лучше будет?
drbaton сказал(а)
Макаешь и колешь агар?
Ну, колоть не надо, такую технику используют для посева облигатных анаэробов.
Просто надо уменьшить количество культуры любым способом.
От разведения в ампуле физраствора, до уменьшения ёмкости посевного инструмента. То же разведение в физе, более правильное действие, но, кмк, для новичка это лишние манипуляции.
Может я и неправ.
Но, каждый решает сам для себя и сам несёт ответственность за свои действия и решения.
Коллеги по хобби! Делаю стартер и сколько шагов ни делаю, всё равно, с определенного шага, концентрация на 1 мл не превышает 126 мл живых клеток. Не помню кто писал, может Уайт, что мах концентрация при разбраживании будет 200 млн/мл. Это на практике действительно так, кто из вас проверял? Хотел схитрить и после шага в 3л декантировал в холодильнике, сливал и наливал опять 3л сусла, а концентрация и, соответственно, общее кол-во клеток в колбе оказывается одинаковое. Для лагера в таком объеме колбы ну никак не довести до требуемых 480 млрд, т.к. 450 предел. Кто как поступает в таких случаях, исключая вариант покупки 10 л колбы? Может есть какая-то лабораторная методика?
MrDAnger сказал(а)
Должно набраживать.
Дрожжи Wyeast 2308 (Munich Lager), сусло 8 Brix охмеленное
1. 3 ед колонии с чаши в пробирку с суслом 2мл - 2 суток до белого осадка, периодически взбалтываю
2. В пробирке 10 мл сусла - 1 сутки
3. В колбе на магнитной мешалке 80 мл сусла - 1 сутки
4. В колбе на магнитной мешалке 600 мл сусла- 1 сутки (120 млрд)
5. В колбе на маг мешалке 3000 мл сусла - 1 сутки (450 млрд)
6. 2 суток в холодильнике 10°С, декантирование
7. В колбе на магнитной мешалке 3000 мл - 1 сутки (450 млрд)
8. Сегодня поставил в холодильник 10°С
Стартер бродит (пузыри и пена, запах), в подсчете кол-во живых