В: Что вы подразумеваете под морфологией колоний?

Морфология колонии описывает, как микроорганизмы появляются на агаризованных средах, таких как агар Сабуро, солодовый агар и т. Д. Морфология просто описывает колонии. Если вы сделаете посев микроорганизмов на чашки с агаром, они разрастутся (если среда подходит для этого конкретного организма) и образуют видимые колонии. Колонии выглядят как пятна, как показано на рис. 1. Важно помнить, что колония состоит из тысяч или миллионов микроорганизмов вместе, а не из одной клетки микроорганизма. В идеале все клетки в колонии изначально происходили из [hide]одной клетки (клональная экспансия). Если отдельные клетки расположены ближе друг к другу на агаре, отдельные колонии перекрываются, и отдельные колонии не видны (левая верхняя часть на рис. 1). В этом случае концентрация дрожжей слишком высока для наблюдения за отдельными колониями.

⇐Рис.1: Brettanomyces bruxellensis на чашке с агаром Сабуро через 11 дней

На рис. 1 показано, что вы получите, если посеете несколько дрожжей Brettanomyces на агаре Сабуро. Округлые пятна – это колонии.

В: Как получить одиночные колонии?

Чтобы получить точное описание колонии, необходимы отдельные колонии. Но как вообще получить одиночные колонии? Как упоминалось выше, если отдельные клетки после штриховки расположены близко друг к другу, колонии могут перекрываться. Чтобы получить единичные колонии, нужно просто обеспечить низкую концентрацию, чтобы предотвратить такое наложение колоний. Одним из примеров этого является разведение клеток непосредственно на чашке с помощью специальной техники штриховки, называемой полосой разбавления или Z-полосой (рис. 2). Здесь имеется в виду применение техники истощающего штриха. прим.MrD`Anger.

Как это делается, также показано на видео⇓:

                                                                                                             Начните с клеточной суспензии. Вы можете даже использовать дрожжевую суспензию. Делается первая полоса, чтобы получить несколько клеток на поверхности агара (рис. 2, полоса 1). Ожидается, что на траектории первой полосы видно много клеток, и отдельные колонии накладываются друг на друга. После первой полосы вы стерилизуете свою инокуляционную петлю, даете ей остыть и собираете несколько клеток, пропуская инокуляционную петлю через первую полосу для второй. На этот раз концентрация клеток уже ниже, потому что вы выбираете только часть дрожжевых клеток. Этот процесс можно проделать второй раз, чтобы в итоге получить три полосы (рис. 2). Поверхность после истощающего штриха может выглядеть так, как показано на рис. 1. К сожалению, в третьей полосе больше нет видимых колоний. В любом случае, я надеюсь, вы уловили идею.

Одиночные колонии полезны не только для описания их морфологии, но и для дифференциации различных микроорганизмов. Например, если вы хотите отделить дрожжи Saccharomyces (пивные дрожжи) от дрожжей Brettanomyces, вы можете использовать истощающий штрих и, надеюсь, одни колонии возникают из одиночных колоний Saccharomyces, а другие – из клеток Brettanomyces .

В: Почему важна морфология?

Предположим, морфология колонии, представляющая один вид микроорганизмов (вспомните концепцию отдельной клетки в начале), уникальна для каждого существующего микроорганизма. Таким образом, морфологическое описание может быть использовано для определения вида микроорганизма на чашке с агаром. Это всего лишь предположение, потому что существует множество микроорганизмов схожей морфологии. Подводя итог, можно сказать, что морфология колоний может быть полезна для определения типа микроорганизма, который есть у вас на чашке. Давайте рассмотрим несколько примеров. Взгляните на рис 3.

⇑Рис.3: колонии на чашке с агаром Сабуро

Я предполагаю, что очевидно, что существуют разные виды колоний и, следовательно, разные морфологии. Есть различия в форме, размере и цвете. Таким образом, разные морфологии происходят от разных микроорганизмов. Я могу дать вам дополнительную информацию здесь. Белые колонии (большие и волнистые) – дрожжевые клетки, плоские бежевые – бактерии. Очень маленькие белые колонии – это еще один вид бактерий. Видите ли, по морфологии можно даже различать дрожжи и бактерии. Вот почему агаровые среды очень распространены в микробиологических лабораториях для выявления различных видов дрожжей / бактерий. Одним из применений здесь может быть проверка пива на микроорганизмы, вызывающие порчу, такие как Lactobacillus (пиво скисло). Выложите немного кислого пива на чашку со средой на которой  лактобактерии могут расти, и если возникают колонии с типичной морфологией Lactobacillus , вы можете быть уверены, что ваше пиво заражено Lactobacillus . Я не буду вдаваться в подробности о различных средах и стратегиях, используемых для выполнения этих трюков. Просто чтобы дать вам представление о том, на что способен весь метод агаровой среды.

⇐Рис.4: “Водный кефир” на пластине с агаром Сабуро

Может быть, это пример, чтобы показать, что колонии не всегда круглые. Некоторые микроорганизмы имеют тенденцию образовывать большие плоские колонии, как это видно на рис. 4. В этом случае я высадил часть своей кефирной культуры на чашку с агаром Сабуро. Вы даже можете увидеть несколько желтоватых колоний. Колонии тоже не всегда белые или бежевые. Вы можете не только выбрать агаровую среду другого типа, но и добавить красители для дальнейшей характеристики. Один из таких примеров показан на рис. 5.

В этом случае добавляется бромкрезоловый зеленый, чтобы различать микроорганизмы, которые могут расти как белые колонии, и такие как зеленые. Различия в цвете предполагают, что на чашке, показанной на рис.5, присутствуют 2 разных микроорганизма⇒

                                                                                                                                                                               Рис.5: Остатки Madrugada Obscura от Jolly Pumpkin на бромкрезоловом зеленом агаре Сабуро

В: Как вы определяете морфологию колонии?

Для начала нужна чистая культура микроорганизма. Это важно, потому что морфология может отличаться, если другие микроорганизмы находятся в одной колонии. Морфология может отличаться даже на других агаризованных средах. Предположим, вы хотите описать морфологию чистых пивных дрожжей ( Saccharomyces cerevisiae ). Первое, что нужно сделать, это нанести штрихами дрожжи на подходящую агаровую среду с полосой разведения и инкубировать чашку до тех пор, пока не появятся колонии, как показано на рис. 6. Sabouraud – это типичная агаровая среда для Saccharomyces и других дрожжей. Также можно использовать солодовый агар.

⇐Рис.6: Калифорнийское лагер 2112 Wyeast на чашке с агаром Сабуро

В случае с рис. 6 я нанес штрихом дрожжи Wyeast 2112 California Lager на тарелку, чтобы проверить чистоту. А что насчет морфологии? Давайте возьмем отдельную колонию и опишем следующие характеристики: форма, край, высота (форма колонии сбоку), размер, текстура, внешний вид, пигментация, непрозрачность. Следующие ниже описания являются лишь примером.

Рис. 7: от: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Bacterial_colony_morphology.png#filelinks ; (Адаптировано и перерисовано⇒

 из Seeley, HW & Vandemark, PJ (1962) Microbes In Action: лабораторное руководство по микробиологии. WH Freeman (Сан-Франциско, Лондон) пользователя Ewen)

Колонии, показанные на рис. 6, можно описать следующим образом:

Поверхность: Вся
Форма: Круглая
Высота: Выпуклая
поверхность: Гладкая
Непрозрачность: Непрозрачная, блестящая
Цвет: Беловатый

Это то, чего вы можете ожидать, когда наносите штрихи на колонию дрожжей на чашке Сабуро. Морфология  разных штаммов Saccharomyces очень похожа при посевах на солодовый агар. Возможно, некоторые из вас заметили, что на чашке с рис. 6 есть еще несколько других колоний. Как и ожидалось, в этом образце дрожжей были некоторые примеси.

В: Всегда ли морфология данного микроорганизма одинакова?

К сожалению нет. Морфология колоний может зависеть от типа используемой агаровой среды, наличия кислорода, питательных веществ, жизнеспособности, уровня pH, времени инкубации, наличия других микроорганизмов… Просто имейте в виду, что описание морфологии не является универсальной методикой. Если вы сталкиваетесь с описанием морфологии определенного микроорганизма, всегда проверяйте тип используемой агаровой среды и условия инкубации.

Один из самых простых способов различить два вида дрожжей – это время инкубации. Колонии Saccharomyces возникают относительно быстро (в течение нескольких дней). Brettanomyces растут намного медленнее (от нескольких дней до недель). Второй трюк – использовать микроскоп и посмотреть на разные колонии. Третий может быть (еще не пробовал), чтобы подавить рост Saccharomyces путем добавления некоторых веществ, ингибирующих рост. На мой взгляд, дифференцировать эти два дрожжевых грибка по морфологии не так-то просто.

В: Можно ли различать дрожжи верхового и низового брожения или даже штаммы дрожжей на основе морфологии колоний?

Насколько мне известно и по моему опыту, различие между дрожжами нижнего и верхового брожения по морфологии колоний невозможно. Кроме того, невозможно различить разные штаммы дрожжей. Хотя в какой-то момент я столкнулся с несколько разными морфологиями пшеничных дрожжей. Однако я бы не стал проводить дифференциацию штаммов по морфологии.

Я надеюсь, что в этом посте была некоторая полезная информация, которая поможет вам лучше понять культивирование агаровых сред. Агаровые среды – очень мощный инструмент в микробиологии, а также широко используются на пивоваренных заводах для проверки наличия примесей в пиве или воде. Поэтому понимание концепции морфологии колоний очень важно для получения максимальной информации о культивировании в агаризованных средах, но также помните о некоторых ограничениях метода.

[/hide]

Очередная “спасенная” статья с сайта www. eurikabrewing.com