Банк дрожжей. Статья № 2.
Чашки с агаром
Описание техники
Чашки с агар-агаром в основном представляют собой чашки Петри (рис. 1), заполненные гелеобразной средой, называемой агаровой средой. Для этого вы смешиваете агаровую среду, нагреваете ее и стерилизуете, а затем разливаете среду в чашки Петри. По мере остывания носитель становится твердым и сухим.
Агаризованная среда обычно состоит из питательных веществ для роста микроорганизмов и агар-агара (или просто агара), который делает всю среду гелеобразной. Агар очень похож на желатин, который используется в кулинарии. Подробнее об агаризованной среде позже.
Чашки с агаром очень широко используются в биологических лабораториях для выращивания таких микроорганизмов, как бактерии и дрожжи. Для этого вы распределяете жидкий образец с взвешенными микроорганизмами на чашке с агаром и ждете появления колоний. Колонии – это пятна, которые вы можете наблюдать. Колонии возникают из одной клетки (теоретически) и образуют колонию из-за увеличения количества клеток в одном месте и становятся видимыми. Это означает, что колония – это множество клеток, происходящих из одной клетки или группы клеток(прим. MrD`Anger). Если вы поместите определенный объем образца на планшет(как я понимаю, вероятно имеется в виду камера для подсчета клеток, типа Горяева или Нейбауэра, прим. MrD`Anger), вы даже сможете определить количество микроорганизмов в образце. Поэтому чашки с агаром – это очень простой метод в микробиологии.
Вы можете не только культивировать микроорганизмы, но и различать некоторые из них, если выберете правильный тип[hide] агара. Это означает, что некоторые бактерии / дрожжи могут расти на одном виде агара, а другие – нет. Уловка здесь в том, чтобы использовать агар подходящего типа(здесь и далее имеются в виду «селективные среды» , прим. MrD`Anger). Вы даже можете добавить дополнительные вещества, такие как антибиотики, чтобы избежать роста бактерий на чашке, добавить красители, чтобы следить за окрашенными колониями, добавить индикаторы pH, чтобы следить за колониями, производящими кислоты, или добавить другие вещества, чтобы избежать роста дрожжей… возможности огромны.
Вернемся к банку дрожжей. Чашки с агаром также можно использовать для хранения дрожжей (какой сюрприз). Самый простой агар для домашних пивоваров – это солодовый агар на основе сухого солодового экстракта(или заранее запасенного сусла с варки, прим. MrD`Anger) и агар-агара для получения студенистой консистенции.
Рецепт сусло-агара опубликован тут, хотя секретом он не является… Пожалуйста, ознакомьтесь с моими предыдущими статьями в разделе публикаций ДРОЖЖИ (прим. MrD`Anger)
Солодовый агар – не единственный выход. Я, например, использую агар Сабуро, специальный агар для выращивания дрожжей. В конце концов, не имеет значения, какой агар вы используете, если на нем могут расти дрожжи. Техника и материал остались прежними. Для новичков агар с солодовым экстрактом, вероятно, лучший способ, поскольку сушеный солодовый экстракт доступен у поставщиков домашнего пивоварения(или заранее запасенное сусло с варки 😉 , прим. MrD`Anger)).
Не беспокойтесь о pH. Вам в основном нужен сухой солодовый экстракт, агар-агар и способ стерилизации всей среды. К сожалению, я не могу рассказать вам об источниках агара. В моем случае агар продается в супермаркетах, потому что агар также используется в выпечке.
Материал
Для банкинга дрожжей с чашками с агаром вам понадобятся:
– Чашки Петри (стеклянные или пластиковые)
– Источник для стерилизации агаровой среды (например, скороварка)
– Инокуляционная петля (очень хорошо работает сделанная своими руками)
– Источник для прожигания инокуляционной петли
– Агар-агар (он же агар)
– Высушенный солодовый экстракт (DME) или сусло 1,040 или 9.8-10Р
По поводу чашек Петри. Например, чашки Петри доступны в продаже. Выбирайте стеклянную или пластиковую посуду.
- Стеклянные чашки Петри можно стерилизовать нагреванием в скороварке или духовке. Дороже пластиковых. Можно использовать повторно.
- Пластиковые чашки Петри обычно используются только один раз. Обычно они плавятся во время тепловой стерилизации … Пластиковая посуда бывает стерильной и нестерильной. В некоторых чашках есть вентиляционные отверстия для газообмена. На мой взгляд, форточки отличные. Однако это не обязательно.
Следующее, что нужно помнить, – покупать чашки Петри с крышкой. По поводу диаметра. Доступны чашки Петри разных размеров. Обычный диаметр посуды – около 94 мм. Однако вы, безусловно, можете купить больше или меньше, если хотите. Я использую нестерильную пластиковую посуду диаметром 94 мм, потому что делаю много посевов и не стерилизую чашки перед использованием. Пока проблем с загрязнениями не было. Если вы планируете много посевов, купите себе пластиковую посуду. (Не понял как связано одно с другим, но с отсутствием стерилизации сред я категорически не согласен и категорически не рекомендую это практиковать. прим. MrD`Anger)
Источник, обеспечивающий стерильность агаровой среды. Это очень важный шаг, который следует учитывать. Ваша среда должна быть стерильной и нагретой до кипения. Это важно, поскольку в противном случае агар не будет растворяться должным образом и не желатинизирует агаровую среду. Лучше всего иметь скороварку, так как давление предотвратит выкипание.
Инокуляционные петли также можно купить или изготовить самостоятельно из нихрома(прим. MrD`Anger). По сути, это металлическая петля … которую необходимо нагреть, прежде чем вы распределите дрожжи по чашке. Это делается пламенем. Газовые горелки, горелки на этаноле, свечи или любое другое пламя подойдут. Для получения дополнительной информации, пожалуйста, ознакомьтесь с моими предыдущими статьями в разделе публикаций ДРОЖЖИ: ЧКД и Среды (прим. MrD`Anger)
Подготовка
- Убедитесь, что у вас есть все необходимое оборудование.
- Сделайте несколько чашек, согласно рекомендациям . Я не хочу объяснять все необходимые шаги в этом блоге, поскольку уже рассмотривали эту тему.
Просто помните, что я использую стеклянные чашки Петри, которые можно стерилизовать в скороварке. Если вы работаете с пластиковой посудой, вам необходимо сначала стерилизовать среду, поскольку пластиковые чашки, вероятно, расплавятся во время процесса стерилизации. С другой стороны, если вы стерилизуете стеклянные чашки Петри со средой, чашки впоследствии могут быть очень влажными. А вода на тарелке может потом размыть ваши дрожжевые колонии … Красивых колоний не получится.
- После того, как чашки остынут, культуру можно наносить штрихами.
- Оставьте чашки в теплом месте на несколько дней, пока не появятся колонии. Если у вас есть только хорошие колонии, такие как показанная выше, вы, по сути, уже освоили технику посева на агар. Отлично сработано!
Опять же, не совсем согласен с методикой, тк на фото не получено достаточно качественного рассева ИСТОЩАЮЩИМ ШТРИХОМ (прим. MrD`Anger)
Банк дрожжей
После появления колоний заклейте чашку лентой, и она готов к хранению. Лента предотвращает высыхание среды в чашке и попадание любых загрязнений. Однако не стоит быть слишком уверенным в ленте. Даже запечатанные чашки в какой-то момент могут загрязниться.
Место хранения
Храните чашку в холодильнике при температуре примерно 6 ° C. Избегайте температур около 0 ° C или ниже. Вы даже можете хранить чашки при более высоких температурах. Однако в этом случае потребуется много пересевов. При более высоких температурах дрожжи по-прежнему растут относительно быстро и рано или поздно образуют очень большие колонии. Может быть, даже покрыть всю поверхность агара. В этом случае вам нужно выбрать колонию дрожжей и поместить ее на другую чашку (это также называется повторным нанесением штрихов или повторным посевом). Снова инкубируйте чашку, пока не появятся колонии. Затем выберите другую колонию и поместите ее на другую чашку… Вы видите, к чему все идет. При более низких температурах выше температуры замерзания дрожжи будут расти относительно медленно. В какой-то момент потребуется повторный посев.
Есть пара моментов.
- Данные рассевы не нацелены на получение чистых культур, это уже работа с чистой культурой, т.о. очистка культуры получается так крайне условной, но заразу есть возможность отследить иногда.
- Пересев с чашки на чашку или с косяка на косяк, т.е. с агара на агар-не самая лучшая идея, идет изменение дрожжевого штамма, поэтому перед пересевами культуру в обязательном порядке надо поместить в сусло, вырастить сильную культуру, что, кстати, обсуждалось в предыдущей статье. Возможно это потребуется сделать несколько раз, каждый раз опеределяя витальность покраской метиленовым синим и микроскопированием.
(прим. MrD`Anger)
Реанимация
Это довольно просто. Просто выберите колонию и сделайте небольшой стартер на 5мл в пробирке. Подробнее об этом процессе ознакомьтесь с моими предыдущими статьями в разделе публикаций ДРОЖЖИ: ЧКД и Среды (прим. MrD`Anger)
Мой опыт использования этого метода
Каковы преимущества / недостатки этого метода как банковского инструмента?
| Преимущество | Недостаток |
| Достаточно простой способ | Чашкам требуется место для хранения |
| Не нужно много оборудования | Загрязнения случаются |
| Видны загрязнения | Требуют трудозарат |
| Чашки с агаром можно использовать для других проектов | Не способ длительного хранения |
Позвольте мне сначала сказать о преимуществах. По сравнению с некоторыми другими методами накопления дрожжей, этот метод довольно прост в применении и не требует сложного оборудования. Кроме того, загрязнения в дрожжах можно легко увидеть. Это можно увидеть, если на чашке появятся другие колонии (другого вида). Если на чашке только один вид колоний, высока вероятность, что дрожжи еще чистые. Однако загрязнения не должны быть видимыми… Некоторые из них не видны на поверхности. Следовательно, загрязнения могут быть видны. Наконец, вы можете использовать чашки с агаром для других проектов, таких как выделение пивных дрожжей или диких дрожжей из коммерческого пива.
Недостатки метода дрожжевого банкинга на агаровых чашках. Если у вас есть много штаммов, для хранения их всех на чашках с агаром потребуется много места для хранения. И много работ по техническому обслуживанию, так как вы должны периодически заменять их. И каждый повторный посев – это возможность проникнуть внутрь заражению. Как уже упоминалось, в какой-то момент даже заклеенная чашка может заразиться. По всем этим причинам хранение дрожжей на чашках с агаром, на мой взгляд, не является методом длительного хранения.
Вы можете спросить себя, почему я все-таки написал пост о чашках с агаром как о банковском инструменте. На мой взгляд, если вы используете только ограниченные штаммы дрожжей (скажем, три разных), размещение их на чашках с агаром может сработать очень хорошо. Просто выберите колонию из чашки с агаром, сделайте микростартер и повторно засевайте другую чашку жидкостью микростартера. С помощью этого метода у вас не только свежие дрожжи на чашке, но и возможность проверить наличие каких-либо загрязнений в стартере.
Если вы все же хотите самостоятельно разобраться с дрожжевым веществом, чашки с агаром – очень простой метод. Даже если вы начнете свою собственную библиотеку дрожжей с другой техникой, такой как хранение их в стерильных растворах, наклонных или замораживающих их, чашки с агаром все равно могут быть полезным инструментом для культивирования дрожжей. Однако вы можете использовать другие методы и не использовать чашки с агаром.
В конце позвольте мне написать о загрязнениях. Взгляните еще раз. Вот как должна выглядеть чистая, здоровая дрожжевая культура на чашке с агаром.
Теперь взгляните на следующие картинки:
Так выглядит бактериальная инфекция Не могу сказать, что это были за бактерии. Но это были бактерии (проверено под микроскопом).
Следующий довольно сложный. Есть одна колония, которая выглядит иначе … Нашли? Понятия не имею, что это было. Еще не проверял.
И колония загрязнения – желтоватая в правом верхнем углу. Найти такие необычно выглядящие колонии может быть сложно. И если такие загрязнения появятся, вы либо избавитесь от дрожжей, либо попытаетесь избавиться от заражения, пересев колонию на новую чашку и надеясь на лучшее.
Далее о формах: Белая пушистая штучка в левом верхнем углу.
Еще одна форма У меня много плесени. Может быть, 80% моих загрязнений – это плесень …
Видимо, сказывается отсутствие стерилизации сред или качество работы (прим. MrD`Anger)
На последней картинке нет загрязнения. Вот так выглядит высохшая чашка. Шанс получить дрожжи из такой чашки невелик …
К сожалению для меня, Lactobacillus не растет на агаре Сабуро. Lactobacillus – очень распространенные бактерии, вызывающие порчу пива. Другой – Acetobacter . Если в одном из образцов дрожжей есть Lactobacillus , я не мог сказать, просто взглянув на чашку с агаром, поскольку колонии Lactobacillus не возникают. Может быть, у кого-то есть опыт работы с Lactobacillus на солодовом агаре. Я хочу завершить этот огромный пост чем-то, что нужно запомнить. Имейте в виду, вы просто видите микроорганизмы, способные расти на агаризованной среде. Любые микроорганизмы, которые не могут расти на агаровой среде, останутся скрытыми … Следите за обновлениями! Следующий пост будет о хранении дрожжей в стерильных растворах.
[/hide]
Обсудим?
“Cпасенная” статья с сайта www. eurikabrewing.com
Автор публикации
Другие записи этого автора:
Крим-эль. Свари свое лучшее пиво. ...
